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如果培養(yǎng)條件不變，以添加成分中不含牛腦垂體提取物的MCDB153的培養(yǎng)液培養(yǎng)角朊細(xì)胞，那么角朊細(xì)胞停止增殖，逐漸脫落。Boyce等。指出，牛垂體提取物對(duì)角朊細(xì)胞的原代培養(yǎng)，凍存和復(fù)蘇至關(guān)重要。牛腦垂體提取物具有強(qiáng)致有絲分裂的作用，進(jìn)行角朊細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)，培養(yǎng)基及添加劑的成分能否滿(mǎn)足角朊細(xì)胞生長(zhǎng)的需要，是培養(yǎng)成功的關(guān)鍵，適當(dāng)濃度的表皮生長(zhǎng)因子和牛腦垂體提取物支持角朊細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖，并抑制其分化，濃度過(guò)高或過(guò)低都不利于其生長(zhǎng)。牛垂體提取物高有絲分裂活性，一致的高活性生長(zhǎng)因子和激...

蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的處理，它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用，以增加探針與靶核酸結(jié)合的機(jī)會(huì)，提高雜交信號(hào).但蛋白酶K的濃度過(guò)高、消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或孵育溫度過(guò)高時(shí)，都會(huì)對(duì)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有一定的破壞，導(dǎo)致組織切片的脫落，細(xì)胞核的消失，從而影響雜交結(jié)果。EDTA緩沖液可以替代蛋白酶K的作用，解決上述出現(xiàn)的問(wèn)題，并能達(dá)到理想的染色效果。蛋白酶K的應(yīng)用比較廣泛，它可以消化包圍靶DNA蛋白，因此使用蛋白酶K能夠增加探針與靶核酸結(jié)合的機(jī)會(huì)增強(qiáng)雜交信號(hào)，但在使用蛋白酶K時(shí)要主要使...

組化筆特征，防水，熱穩(wěn)定，使試劑定位于細(xì)胞和組織切片上特定的位置，避免試劑浪費(fèi)。淺藍(lán)色，容易識(shí)別，可溶解于二甲苯及二甲苯替代物，方便清除，環(huán)保，不含碳氟化合物和氯碳化合物等破壞臭氧層的物質(zhì)。組化筆使用方法，先將組織切片脫蠟水化，然后用薄紙抹去在玻片上的組織邊緣的液體，再用免疫組化筆在玻片上被檢體周?chē)?huà)圈或在組織邊緣上下各畫(huà)一條線(xiàn)，干燥10-15秒，之后將玻片浸在PBS耐熱性能，試驗(yàn)過(guò)程中的耐熱性為120攝氏度以下。石蠟組織切片的畫(huà)圈，切片脫蠟水化，PBS沖洗，甩干PBS液，在...

雞胚提取物抗凝作用，靜脈注射木瓜蛋白酶可引起組織胺釋放，延長(zhǎng)血凝時(shí)間，防止發(fā)生休克。從漿計(jì)中獲得的蛋白性物質(zhì)無(wú)論試管試驗(yàn)或整體試驗(yàn)均有顯著的抗凝作用，在抗凝劑量時(shí)(狗，2mg/kg)，對(duì)心血管及呼吸系統(tǒng)無(wú)明顯作用，大劑量對(duì)心臟有直接抑制作用。由于過(guò)敏及引起回腸痙攣，其治療應(yīng)用仍受限制。雞胚提取物蛋白酶的作用，木瓜蛋白酶，能幫助蛋白消化，可用于慢性消化不良及胃炎等。亦可用于腹腔注射防治粘連，動(dòng)物試驗(yàn)證明其防治粘連再發(fā)的效果比胰蛋白酶好。未成熟果實(shí)的漿汁在炭疽病灶中能消化損壞的組...

β-Tubulin即微管蛋白，是細(xì)胞的一種骨架蛋白。Tubulin分為α、β、γ、δ、ε等多種tubulin，其中α-Tubulin和β-Tubulin可以形成異源二聚體，是形成微管的zui主要的兩種Tubulin。α-tubulin和β-tubulin分子量分別為55kDa和50kDa，其實(shí)際檢測(cè)條帶均在55kDa左右。β-tubulin抗體被廣泛用于WesternBlotting時(shí)上樣量是否一致的參照，也常被用于免疫染色觀察細(xì)胞的微管結(jié)構(gòu)。β-Tubulin抗體的英文別名...

Marker，染色及內(nèi)參等相關(guān)問(wèn)題Q：用的是預(yù)染marker，但是電泳總跑不全8條帶，請(qǐng)問(wèn)什么原因？怎樣改善？膠用過(guò)8％，10％，12％，都是這樣。marker是新買(mǎi)的。A：一般來(lái)說(shuō)，是小分子量Marker跑走了，可以增加膠濃度或減少電泳時(shí)間。梯度膠也是不錯(cuò)的選擇。（梯度凝膠愛(ài)必信就可提供呦）Q：WesternBlot哪種染色好？A：（1）陰離子染料是zui常用的，特別是氨基黑，脫色快，背景低檢測(cè)極限可達(dá)到1.5μg，考馬雖然與氨基黑有相同的靈敏度，但脫色慢，背景高。麗春紅S...

針對(duì)抗體常見(jiàn)問(wèn)題Q：做細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)，要做磷酸化某因子WesternBlot，其二抗有何要求？A：對(duì)二抗有無(wú)要求，要看你實(shí)驗(yàn)條件來(lái)選擇，一般推薦用HRP標(biāo)記的二抗。Q：免疫組化和WesternBlot可以用同一種抗體嗎？A：免疫組化時(shí)抗體識(shí)別的是未經(jīng)變性處理的抗原決定簇（又稱(chēng)表位），有些表位是線(xiàn)性的，而有的屬于構(gòu)象型；線(xiàn)性表位不受蛋白變性的影響，天然蛋白和煮后的蛋白都含有；構(gòu)象型表位由于受蛋白空間結(jié)構(gòu)限制，煮后變性會(huì)消失。如果你所用的抗體識(shí)別的是蛋白上連續(xù)的幾個(gè)氨基酸，也就是線(xiàn)...

針對(duì)樣品的常見(jiàn)問(wèn)題：Q：細(xì)胞水平要做WesternBlot，多少細(xì)胞提的蛋白夠WesternBlot？A：一般地5*106就足夠了。Q:同一樣品能同時(shí)提RNA又提蛋白嗎，這樣對(duì)WesternBlot有無(wú)影響?A：能，沒(méi)有問(wèn)題的。Q:同一蛋白樣品能同時(shí)進(jìn)行兩種因子的WesternBlot檢測(cè)嗎？A：當(dāng)然可以，有的甚至可以同時(shí)測(cè)幾十種樣品。Q:如果目標(biāo)蛋白是膜蛋白或是胞漿蛋白，操作需要注意什么？A:如果是膜蛋白和胞漿蛋白，所用的去垢劑就要溫和得多，這時(shí)建議加上NaF去抑制磷酸化酶...