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Products產(chǎn)品中心
首頁 > 產(chǎn)品中心 > 細胞生物學 > 細胞檢測 > abs50199Fluo-8免洗細胞鈣流檢測試劑盒

Fluo-8免洗細胞鈣流檢測試劑盒

簡要描述:許多細胞內重要生物反應涉及到鈣流。檢測細胞內瞬間鈣流變化對細胞內生物反應的研究及靶向藥物研發(fā)至關重要。鈣特異性結合熒光染料法是檢測細胞內鈣流的常用的手段。

  • 產(chǎn)品型號:abs50199
  • 廠商性質:生產(chǎn)廠家
  • 更新時間:2025-06-16
  • 訪  問  量:132

詳細介紹

品牌absin貨號abs50199
規(guī)格100T供貨周期一周
主要用途鈣流檢測
描述
        許多細胞內重要生物反應涉及到鈣流。檢測細胞內瞬間鈣流變化對細胞內生物反應的研究及靶向藥物研發(fā)至關重要。鈣特異性結合熒光染料法是檢測細胞內鈣流的常用的手段。
        Fluo-8 作為新一代鈣流檢測染料提高了細胞裝載和鈣反應,同時保持了 Fluo-3 和Fluo-4 光譜波長 Ex/Em≈490/520 nm。Fluo-8 AM 可以在室溫下裝載到細胞中,而 Fluo-3 AM 和Fluo-4 AM 需要37°C 進行細胞裝載。此外,F(xiàn)luo-8 AM 比 Fluo-4 AM 亮兩倍,比 Fluo-3AM 亮四倍。
        鈣流染料在細胞裝載及鈣流分析中常需要進行細胞洗滌,這顯著增加了檢測中的工作流程,由于一些細胞可以在洗滌過程中脫落,這也增加了分析中數(shù)據(jù)變量。因此,免洗染料及方法是現(xiàn)在的發(fā)展趨勢。為了減少染料被細胞轉運到細胞外,陰離子轉移蛋白抑制劑需要加到染料加載溶液及后續(xù)的分析溶液中。
產(chǎn)品特點:
1、免洗
在整個分析過程中,不需要經(jīng)過細胞洗滌過程。細胞洗滌可以降低細胞本底熒光,但增加了操作步驟,增加了細胞脫落及孔間差異風險。
2、更高的靈敏度
Fluo-8熒光強度比Fluo-3,F(xiàn)luo-4強。
3、檢測方便
Fluo-8可以用與Fluo-4相同的檢測儀器及熒光通道。針對某種細胞的具體實驗參數(shù),如細胞密度,溫度,體積,時間,儀器收集及分析設定等,需通過預實驗確定。
4、適合于高通量檢測
反應可以在96孔或384孔板上進行,滿足一次同時進行大批量的微孔板實驗需求。
產(chǎn)品組成:
試劑盒內容包括 Fluo-8 試劑及緩沖液,分別灌裝于 1 mL 螺旋管,及 10 mL 或100 mL 的棕色瓶中,規(guī)格如下:
規(guī)格Fluo-8 試劑緩沖液可檢測的 96-孔板孔數(shù)可檢測的 384-孔板孔數(shù)
10mL100uL10mL2001000
100mL1mL100mL200010000
使用方法
1、細胞準備:
(1)正常培養(yǎng)基培養(yǎng)的細胞消化后,加培養(yǎng)基,細胞計數(shù),取需要的細胞總數(shù),離心。以下是按 96 孔板的建議用量,384 板需要的細胞數(shù)及體積,對應調整。96 孔培養(yǎng)板一般建議每孔細胞 20,000 左右。
(2)用 Hank’s 鹽溶液或類似無酚紅培養(yǎng)液,加胎牛血清至 1%濃度,用該培養(yǎng)液重新懸浮上述離心后的細胞。然后鋪細胞于培養(yǎng)板,每孔 50 uL。細胞培養(yǎng) 3-5 小時至貼壁或過夜。
2、染料裝載:
(1)取出緩沖液在室溫平衡 30 分鐘,顛倒混勻幾次。如果緩沖液注明是 10x 濃縮液,需要用去離子水稀釋成 1x 的工作緩沖液。
(2)取出 Fluo-8 試劑,室溫平衡 5-10 分鐘,離心將管內容物集中于管底。如果試劑不是一次性用完,可以對試劑進行分裝,分裝后的 Fluo-8 試劑繼續(xù)-20℃保存,減少凍融次數(shù)。注意避光。
(3)計算好需要的染料裝載液體積,按每孔 50 uL 計算。將 Fluo-8 試劑加于1x 的工作緩沖液,充分混勻。Fluo-8 試劑用量建議起始按 1:100 稀釋到工作緩沖液中,稀釋度可根據(jù)不同細胞株及需求調整。
(4)計算需要的儲存液體積,加入到上述 Fluo-8 工作緩沖液中,充分混勻,此為裝載液。
(5)吸去培養(yǎng)板孔中的培養(yǎng)液,將裝載液加到細胞培養(yǎng)板孔,每孔 50 uL。輕輕振搖10 秒鐘,加蓋,37℃ 培養(yǎng) 1 小時。
3、細胞內鈣流檢測:
(1)準備化合物及激動劑:激動劑建議不少于 6 個濃度梯度。每反應板設立未加激動劑或化合物的對照孔。激動劑/化合物板每孔 100-200 uL體積。
(2)準備與檢測儀配套的專用移液槍頭盒。
(3)準備檢測緩沖液:檢測緩沖液是加了的 Hank’s 鹽緩沖液。
(4)吸去培養(yǎng)板孔中的染料裝載液,每孔加檢測緩沖液 100 uL。
(5)設定好儀器檢測程序及各相關參數(shù),檢測波長為 490/525nm,每 1-3 秒讀1 次,連續(xù)讀2 分鐘。
(6)在加激動劑/化合物前讀取一次基礎讀數(shù)。
(7)設定好化合物/激動劑板孔及槍頭與實驗細胞的對應位置。
(8) 啟動加激動劑/化合物的檢測程序,收集實驗數(shù)據(jù)。
(9)用(F-F0)/F0 *100%的方法或其它被驗證的方法進行數(shù)據(jù)處理分析。
性能
儲存/保存方法
未開封的緩沖液儲存于 4℃,使用前需要取出在室溫平衡 30 分鐘,顛倒混勻幾次。分裝的緩沖液或 1 x 工作液可儲存于室溫(22℃)1 周。Fluo-8 試劑儲存在-20℃ 或-80℃性能穩(wěn)定1 年。
溫馨提示:本產(chǎn)品僅作科研實驗使用,不支持臨床等研究


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