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快速內切酶BspQI

簡要描述:快速內切酶BspQI屬于 Type IIS 型限制酶,識別非回文序列,并在識別序列之外進行切割,常用于Golden Gate組裝。經過優化的反應 Buffer使BspQI最大限度發揮功能,同時反應緩沖液包含重組白蛋白,其可增強多種酶的穩定性。

  • 產品型號:abs60337
  • 廠商性質:生產廠家
  • 更新時間:2025-03-26
  • 訪  問  量:2550

詳細介紹

品牌absinCAS-
分子式-純度-
分子量-貨號abs60337
規格500U供貨周期現貨
主要用途-應用領域化工,生物產業,綜合
產品描述
描述

快速內切酶BspQI屬于 Type IIS 型限制酶,識別非回文序列,并在識別序列之外進行切割,常用于Golden Gate組裝。經過優化的反應 Buffer使BspQI最大限度發揮功能,同時反應緩沖液包含重組白蛋白,其可增強多種酶的穩定性。


識別位點:
5'...C G T C T T C (N)1↓...3'
3'...G C A G A A G (N)4↑...5'


同裂酶:
SapI, LguI, PciSI
注:同裂酶對于不同的甲基化修飾可能具有不同敏感性。

建議反應條件:
1× HN 緩沖液;
50℃溫育;
參照“DNA 酶切流程"配制反應體系。


失活條件:
80℃溫育 20 min


產品組成:


組分規格

BspQI (10 U/μl)

50ul

10× HN Buffffer

1ml






質量控制:
超長時間溫育檢測 :
最適反應溫度下,將 10 U BspQI 與 1 μg λDNA 共同溫育 3 h,未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解,延時酶切可能出現星號活性。


酶切-連接-再酶切檢測:
最適反應溫度下,使用10 U BspQI消化底物,回收酶切產物。在22℃下使用適量T4 DNA Ligase (Fast)可以將酶切產物重新連接。將連接產物再次回收后,使用相同的內切酶可以重新切開連接產物。


DNase 殘留檢測:
將10 U BspQI與雙鏈DNA底物在 37℃溫育 16 h,通過 DNA電泳檢測雙鏈DNA底物無變化。

使用方法
1、DNA 酶切流程
(1)在冰上按如下建議的加樣順序配制反應體系:
ddH2Oup to 50ul
10× HN Buffffer5ul
底物 DNAa1ug
BspQI (10 U/ul)1ul
Total50ul
a. DNA 底物中應不含氯仿、乙醇、EDTA、洗滌劑或高濃度鹽,否則將會影響 BspQI 酶活性;
(2)輕柔吸打或輕彈管壁以混勻(切勿渦旋),然后瞬時離心以收集掛壁液滴;
(3)50℃溫育 15 min~1 h;

(4)80℃溫育 20 min 即可使酶失活,停止反應,或者通過吸附柱或氯仿純化終止反應。


2、注意事項
(1) 反應體系中加入的酶體積不應超過總體積的 10%,避免酶中過多的甘油引起星號活性;

(2)限制性內切酶存儲緩沖液中的添加劑 ( 例如甘油、鹽 ) 與底物溶液中的污染物 ( 例如鹽、EDTA 或乙醇等 ) 相同,反應體積越小,酶切反應抑制效應越強。


不同 DNA 中的酶切位點數量
λDNAΦX174pBR322pUC57pUC18/19SV40M13mp18/19Adeno2
101111007
甲基化修飾影響
DamDcmCpGEcoKIEcoBI
無影響無影響無影響無影響無影響
儲存/保存方法
-20°C 及以下運輸及保存,長期保存建議放 80°C 。有效期2年。
溫馨提示:本產品僅作科研實驗使用,不支持臨床等研究



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