答：我們查閱大量文獻，構建原發腫瘤和轉移癌的類器官都是用的適合原發腫瘤的類器官培養基，比如腸癌的原發灶和轉移灶，乳腺癌的原發灶與轉移灶，所以用原發部位的癌類器官培養基比較好。

答：轉移性的類器官形態和原發性的比較像。

答：類器官長的比較大的話，50-100um之間加藥就可以了；長的比較小的類器官50um左右就行了。一般傳代后2-3天，就可以加藥，加藥再培養3-4天可以檢測。

答：直接放在冰上30min，凝固后直接放在70%乙醇里，4℃過夜。

答：可以用組織凍存液梯度凍存放液氮，等條件成熟再復蘇培養即可。

答：和惡性積液的方法類似，離心回收細胞，包埋基質膠，加類器官培養基。

答：不管是哪種污染，細菌，霉菌，類器官都必須舍棄，同時往培養皿中倒入84等消殺試劑，防止傳播。

答：流式分選是可以的，也直接挑取你要的類器官擴增即可。一般類器官長到100um肉眼是可見的，直接超凈臺上，使用200μL移液槍頭直接挑下來類器官，然后進行傳代操作。

答：所以一般鋪板后，不會馬上做藥篩，會養1~2輪換液周期（3~6天）從新評估各個孔的情況，選取合適的孔做實驗。

答：有些24h，有些48h，比如化療藥，每種藥的時間點是不一樣的，要根據自己要做的藥物，摸一下時間梯度。

答：排除掉培養操作技能的影響，肝實質癌類器官，對于未治療的肝癌組織培養成功率相比治療過的成功率高，可能經過治療后的肝癌細胞活性降低，同時也和營養體系的優化等有一定關系。

今天講解就到這了，大家如有實驗問題，歡迎入群交流哦！

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