細(xì)胞消化液的使用方法介紹
更新時(shí)間:2022-07-20 點(diǎn)擊次數(shù):1733
一般細(xì)胞長(zhǎng)至80%-90%密度則需要傳代消化,貼壁細(xì)胞傳代前,需要把細(xì)胞用消化試劑從培養(yǎng)容器表面解離出來(lái),細(xì)胞得以分離成單個(gè)懸液傳代至含新鮮培養(yǎng)基的新容器內(nèi)。
細(xì)胞消化液使用原料為基因工程方法生產(chǎn)的胰蛋白酶,無(wú)動(dòng)物源性,無(wú)病毒污染可能性,且內(nèi)毒素水平低于藥典標(biāo)準(zhǔn)(<0.06EU/mL)。可以替代動(dòng)物源性胰蛋白酶。可用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞等原代細(xì)胞。
使用方法:
1、在顯微鏡下觀察細(xì)胞,當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到90%,即可傳代。
2、在超凈臺(tái)/安全柜中,吸走培養(yǎng)瓶中舊的培養(yǎng)液,加入PBS溶液洗一次,加入細(xì)胞消化液使之*覆蓋皿/瓶底。
3、室溫孵育4-5分鐘或37℃孵育2-3分鐘(不同細(xì)胞類型消化時(shí)間略有差異),顯微鏡下觀察到大部分細(xì)胞邊緣開始脫離皿/瓶底。
4、加入與消化液等倍體積細(xì)胞培養(yǎng)基,用移液器輕輕吹打瓶壁上未*脫離的細(xì)胞,并輕輕吹打混勻,使細(xì)胞*分散。
5、將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中,1200rpm離心3min。
6、棄上清,加入對(duì)應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)液,重懸細(xì)胞,按比例進(jìn)行傳代,均勻鋪在培養(yǎng)皿/瓶中,置于37℃,5%CO2條件下培養(yǎng)。