Western Blot實(shí)驗(yàn)問答集錦之蛋白marker篇
更新時(shí)間：2017-03-01 點(diǎn)擊次數(shù)：6651
Western Blot （WB）即蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)。是將蛋白樣本通過聚丙烯酰胺電泳按分子量大小分離，再轉(zhuǎn)移到雜交膜（blot）上，然后通過一抗/二抗復(fù)合物對(duì)靶蛋白進(jìn)行特異性檢測(cè)的方法。WB是進(jìn)行蛋白質(zhì)分析zui流行和成熟的技術(shù)之一。本篇討論Western Blot實(shí)驗(yàn)中關(guān)于蛋白marker的常見問題分析，有助于成功完成WB。
1.蛋白marker為什么跑的條帶不清楚？
答：首先確認(rèn)膠的濃度、PH值，離子強(qiáng)度是不是正常，這些都會(huì)影響條帶的質(zhì)量。其次確定電泳液的PH、離子強(qiáng)度是否正確，如甘氨酸濃度太低時(shí)，蛋白會(huì)濃縮不好；電泳液新鮮配制。
2.為什么蛋白marker總是跑得比其他樣品慢？
答：你的蛋白marker跑得比其他指示劑慢，可能只是因?yàn)樗麄兊碾娪舅俣炔灰粯樱皇且粋€(gè)公司生產(chǎn)的，選擇愛必信一籃子采購(gòu)就可以避免這樣的問題了。
3.為什么轉(zhuǎn)膜時(shí)marker不清楚？
答：在western Blot過程中，蛋白Marker就像個(gè)螺絲釘一樣雖然是個(gè)小細(xì)節(jié)，然而就是這樣一個(gè)小細(xì)節(jié)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有著不可忽視的作用。這個(gè) Western Blot參照家族的一員的作用主要是用來(lái)指示蛋白條帶所對(duì)應(yīng)的分子量大小，只有標(biāo)準(zhǔn)量無(wú)誤了，實(shí)驗(yàn)結(jié)果才有說服力，除此之外，蛋白標(biāo)準(zhǔn)還有表示轉(zhuǎn)移成功或者蛋白在凝膠上的電泳程度等等的作用，所以選擇正確的蛋白Marker也是western blot實(shí)驗(yàn)成功的必要條件之一。
4.怎么制作蛋白marker？
答：少年，你能提出這個(gè)問題是很有前途的。蛋白marker制作復(fù)雜，愛必信有現(xiàn)成的，*，實(shí)驗(yàn)效果*，拿好不謝！
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